查找：谷胱甘肽S-转移酶（GST）测试盒(微量法)

测定意义：
GST是一种具有多种生理功能的蛋白质家族，主要存在于细胞质内。GST是体内酶系统的重要组成部分，主要催化各种化学物质及其代谢产物与GSH的巯基共价结合，使亲电化合物变为亲水物质，易于从胆汁或尿液中排泄，达到将体内各种潜在或具备毒性的物质降解并排出体外的目的。因此，GST在保护细胞免受亲电子化合物的损伤中发挥着重要的生物学功能。此外，因为GST具有GSH-Px活性，亦称为non-Se GSH-Px，具有修复氧化破坏的大分子如DNA、蛋白质等的功能。注意，GST催化的反应减少GSH含量，但是不增加GSSG含量。

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测定原理：
GST催化GSH与CDNB结合，其结合产物的光吸收峰波长为340nm；通过测定340nm波长处吸光度上升速率，即可计算出GST活性。
自备仪器和用品：
低温离心机、水浴锅、可调节移液器、紫外-可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、和蒸馏水。

二、GST  测定操作
1、 混合试剂配制：将试剂二与试剂一按 1：8 混合
2、 试剂三放在 25℃预温
3、 分光光度计调到 340nm 处，设定时间为 5min，用双蒸水调零
4、 取 0.1ml 样品与 0.9ml 混合液混合，于 25℃预温 5min，再加入试剂三 0.1ml，迅速混匀，于 340nm 处
测定 5min 内吸光值的变化,第 0s 的吸光值记为 A1，第 300s 的吸光值记为 A2
5、 空白管测定为操作 4 中以 0.1ml 试剂一代替 0.1ml 样品液
酶活计算：
一、 血液 GST  活性计算
1、 GST 活力单位定义： 在 25℃下， 每 ml 血液每分钟催化 1μmol/L CDNB 与 GSH 结合的 GST 酶量为 1U。
2、 计算公式：
GST（U/ml）=ΔA 340 /min×〔10 6 / (ε·d) 〕×（V总/V样）=ΔA /min×10 6 / (9.6×10
3 ×1) 〕×1.1/0.1
340
=ΔA /min×1145.83
340
△A 340 =△A 测定管 -△A 空白管 ，△A 测定管 与△A 空白管 均等于（A2-A1）/5，即每分钟吸光值变化
3 mol/L ? cm
ε：产物在 340nm处摩尔吸光系数为 9.6×10
10 6 ：摩尔分子换算成微摩尔分子
d ：比色杯光径（cm）
V 总：反应总体积（ml）
V 样：所用样品体积（ml）
二、  组织 GST  活性计算
1、 GST 活力单位定义：在 25℃下，每毫克蛋白每分钟催化 1μmol/L CDNB 与 GSH 结合的 GST 酶量为
1U。
2、 计算公式：
GST（U/mg）=△A 340 /min×[10 6 / (ε ?d)]×(V总/V 样)÷Cpr =△A 340 /min×10 6 /(9.6×10 3 ×1)×1.1/0.1÷Cpr
=△A 340 /min×1145.83÷Cpr
△A 340 =△A 测定管 -△A 空白管 ，△A 测定管 与△A 空白管 均等于（A2-A1）/5，即每分钟吸光值变化
3  mol/L ? cm
ε：产物在 340nm处摩尔吸光系数为 9.6×10
10 6 ：摩尔分子换算成微摩尔分子
d：比色杯光径（cm）
V 总：反应总体积（ml）
V 样：所用样品体积（ml）
Cpr：蛋白浓度（mg/ml）

注意事项：
a) 样品处理等过程均需要在冰上进行，且须在当日测定酶活力
b) 本法测定 GST 活性的线性范围可达 76U/L，测定前先用 1～2 个样做预实验，如 5min 内反应不成线性，
须对样品做相应稀释，稀释时用样品提取液稀释，计算结果乘以稀释倍数。
c) 测定反映的温度对测定结果有影响，请控制在 25℃
不同测定材料中 GST  酶液提取的注意事项